服务Service

蛋白表达纯化

蛋白表达纯化

重组蛋白表达与纯化技术服务——原核表达系统(E. coli表达系统)

欣百诺目前成熟的表达体系包括:

原核表达系统(大肠杆菌 E. coli表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia表达系统)、昆虫细胞表达系统(BEVS表达系统)和哺乳动物细胞表达系统,每种表达系统都具有克级以上的制备能力。欣百诺建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及一流的服务。

原核表达系统技术服务按步骤收费,您可以选择从以下任意一步开始提供服务或仅选择其中的单独一步,详细价格请垂询。 如需前期分子生物学技术服务请参考相关内容。

1step

E. coli表达菌株筛选:

扩增并抽提构建好的表达质粒。
将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。
至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
SDS-PAGE电泳检测目标蛋白的表达情况,并挑选合适的阳性表达菌株用于目标蛋白的表达。
可提供表达菌株:DH5α,  BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, Shuffle,Rosetta(DE3)pLysS,BL21(DE3) Chaperones, Rosetta-gami。

提供客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

服务周期:1周

2step

目标蛋白表达及纯化:

摇瓶培养1L重组菌株,诱导表达目标蛋白。
通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(Tag),再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供客户:纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达95%以上。

时间:2-3周

            备注:
1. 如果没有获得目标蛋白,则需要按照步骤收费。如果最终得到的产品未达到合同要求而客户又同意接受该产品,则双方协商本步骤费用(给予客户20%~50%折扣)。
2. 如果客户需要详细的纯化工艺,包括详细纯化条件及每步结果,则需要加收相应费用。具体收费情况根据不同项目情况进行协商。
3. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同,我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg,最多5mg的目标蛋白,所收取的费用是相同的。
4. 我们提供的最终产品一般为保存于常规缓冲液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液)中的蛋白质溶液,并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。但因为我们无法为每个定制的蛋白建立活性检测系统,所以我们无法保证最终产品的生物学活性,不过我们承诺将会按照最大可能保护其活性的方法来制备目标蛋白。 如果客户一定要求目标蛋白活性,我们可以先提供约50μg纯化后样品供客户检测活性。若样品活性不合格,我们不再提供目标蛋白给客户并只收取本步骤费用的30% ,而如果样品活性合格,我们将提供合同要求的相同质量的目标蛋白给客户并需要加收本步骤费用的100%。 5. 每次Western-blot检测最多7个样品,因为要加入阳性对照,阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测,如果需要更多次检测则需另收费。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗,如果客户需要使用其他一抗,则需要客户提供。另外由于Western-blot检测结果受很多客观因素影响,因此我们并不能确保检测结果(可能会出现假阳性或是假阴性的结果)。如果结果不正常,我们可以免费重做一次。

3step

目标蛋白的再加工及详细检测

对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。

服务内容:

1. 复性研究:
利用多达18种不同复性缓冲液的体系,对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。
可根据客户要求,按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。
可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺(需额外收费,具体收费金额需要根据不同项目情况进行协商)。
2. 除内毒素
3. 过滤除菌
4. 冻干

4step

大规模制备

如果想要纯化获得克级蛋白,需要使用发酵罐发酵获得上百克到公斤级的菌体,novoprotein有比较成熟的发酵罐发酵平台,可以进行大肠杆菌或者酵母菌的高密度发酵。
服务内容
1. 5L 小罐发酵(2.5L工作体积),周期2周
2. 50L 大罐发酵(25L 工作体积),一般可收获1Kg左右菌体,周期2周
提供客户:合格的目标蛋白及服务报告。

时间:2周



专注
品质


1

分子生物学
酶类


1余种

细胞
因子


1余种

            上海近岸科技有限公司成立于2004年,是国内首家专门从事重组蛋白质制备工艺开发及生产的高科技企业。
novoprotein 隶属于上海近岸科技有限公司,提供重组蛋白制备相关的全套技术服务。