关于About

新闻资讯

发布时间:2020-09-17

发布人:

全能核酸酶

为生物制品规模化生产解决核酸残留困扰


什么是全能核酸酶?

BenzoNuclease 是一种来自于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),经基因工程改造的核酸内切酶。BenzoNuclease可降解双链、单链、线状、环状的DNA和RNA,完全将核酸降解成3~5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。因其能高效降解任何形式的 DNA 和 RNA,又被称为“全能核酸酶”。 

无论在实验室研究还是在工业级生产的过程中,BenzoNuclease是去除生物制品中所有形式DNARNA的一种有效工具酶。通过高效的核酸去除,可显著提升后续实验、生产的效果及产量,性能优于其他核酸去除方法 

本公司可提供GMP条件下生产的BenzoNuclease,质量、性能、供货能力可靠,为您的研究与生产助力。


BenzoNuclease可为您解决如下问题

  • 去除疫苗类产品外源性核酸,降低核酸残留毒性风险,提高产品安全性

  • 降低核酸引起的料液粘度,缩短处理时间,提高蛋白产量

  • 去除缠绕在颗粒(病毒、包涵体等)表面的核酸,利于颗粒的释放和纯化

  • ELISA、柱层析、二维电泳和印迹分析的样品制备,经核酸酶处理后可提高分辨率和回收率

  • 用于预防细胞的结团

  • ……


选择BenzoNuclease的6大理由

  • 可以降解所有形式的 DNA 和 RNA

  • 极高的核酸酶活性,样品中的核酸残留经短时间处理就能降低到皮克级别

  • 稳定性高,耐受性强,适应多种操作条件

  • 无动物源性

  • GMP 条件生产,满足从研发到生产的大规模使用需求

  • 符合 ISO9001 质量平台


BenzoNuclease严格的质量控制标准

image.png


BenzoNuclease相关产品信息

image.png


BenzoNuclease的反应条件

image.png


BenzoNuclease酶活检测

image.png

BenzoNuclease耐盐度检测

image.png


相关产品

货号   

产品名称   

规格   

GMP-1707      

BenzoNuclease

100kU/200kU/5000kU

M046-01A                    

BenzoNuclease (His tag)

10kU

M046-01B    

BenzoNuclease (His tag)

10kU×5

M056-01A

BenzoNuclease

10kU

M056-01B

BenzoNuclease

10kU×5

详询请致电400-600-0940。


常见问题Q&A

1.       在哪一步中加入BenzoNuclease?

这取决于您使用BenzoNuclease的目的。例如,在纯化大肠杆菌表达蛋白的过程中,BenzoNuclease可与裂解试剂一同加入样本中。

2.       当反应温度低于37℃时,如何保证BenzoNuclease的消化效果?

在体系固定的情况下,BenzoNuclease的消化效果主要取决于酶用量、反应温度以及反应时间,当反应温度较低时,为避免过多的BenzoNuclease引起的残留问题,更加推荐延长反应时间来保证BenzoNuclease的消化效果。

3.       BenzoNuclease的抑制条件有哪些?

BenzoNuclease可在较为宽泛的条件下保持活性,但1-2mM Mg2+对其活性至关重要。

一般情况下,BenzoNuclease的活性可被高盐抑制,例如:> 500 mM的一价阳离子(如Na+、K+等)、>100 mM的盐酸胍(guanidine HCl)、> 100 mM的磷酸盐(phosphate)、> 100 mM 的硫酸铵(ammonium sulfate)等。此外,螯合剂也可通过螯合体系中的Mg2+以达到抑制酶活的作用,通过加入更多的Mg2+可恢复BenzoNuclease的活性(1mM的EDTA可部分抑制BenzoNuclease活性,5mM的EDTA可使其活性丧失约90%。

4.       BenzoNuclease与蛋白酶抑制剂可以兼容吗?

可以。但需要注意,最好选择不含EDTA的蛋白酶抑制剂(≥1mM的EDTA可抑制BenzoNucleased的活性)。

5.       如何去除BenzoNuclease?

BenzoNuclease融合了6×His标签,可通过镍柱将其去除。此外,也可通过TFF(tangential flow filtration)、透析及色谱(IEX, SEC, HIC)等方法将其去除。


附:

生产生物制品的宿主细胞多是连续传代细胞(continuouscelllines, CCLs),其调控生长的基因失灵,而拥有无限增殖的能力,CCLs的残留DNA可能使人体细胞生长失控,变成肿瘤细胞。所以需要严格控制生物制品的残余DNA,避免这种风险危害。1984年的国际会议上采纳了残余DNA的临时标准,即来自CCLs的生物制品DNA残留不能超过10pg/人份剂量。1986年WHO的会议指出残余宿主DNA的主要风险与其潜在致瘤活性有关。

此外,残余DNA中可能存在感染性病毒基因组,病毒基因组能够扩增并产生感染性病毒粒子。体外实验表明,1pg逆转录病毒的前病毒DNA就具有感染性。有些残留DNA可能携带HIV病毒或者Ras致癌基因,DNA感染性风险可能比致瘤风险更高。

另外,有学者认为,接种几十针疫苗后,其残余的DNA累积可能具有其他潜在危害:未发生降解的外源DNA,在哺乳细胞基因LINE-1的逆转录转座子作用下有插入细胞基因组的可能性,带来其他潜在风险。

而且,由于微生物来源的基因组DNA富含CpG和非甲基化序列,增加了重组蛋白药物在体内的免疫原性风险,可能增加体内免疫反应,诱导产生DNA抗体。

因此从安全角度,在生物制品的生产工艺中必须有去除DNA的步骤,并进行检验验证。有研究采用病毒DNA定量感染的方法评价DNA的灭活程度,采用Benzonase全能核酸酶或者b-丙内酯等化学灭活方式可消除其感染活性。WHO和各国药物监管机构一般控制100pg/每剂量的残留DNA,特殊情况下最高允许10ng/剂量。

image.png

来源

名称

细胞

DNA残留标准

进口疫苗

小儿麻痹疫苗

Vero

10pg 剂量-1

狂犬病疫苗

Vero

10ng 剂量-1

国产疫苗

肾综合征出血热疫苗

Vero

100pg 剂量-1

乙型脑炎疫苗

Vero

10pg 剂量-1

狂犬病疫苗

Vero

100pg 剂量-1

乙型肝炎疫苗

Vero

10pg 剂量-1

甲型肝炎灭活疫苗

Vero

100pg 剂量-1

治疗性生物制品

EPO、单克隆抗体等

CHO

100pg 剂量-1

干扰素、GM-CSF、白介素等

E.coli/

Yeast

10pg 剂量-1

我国参照WHO、FDA和欧盟标准,很早就对生物制品中残余DNA含量进行限制。从卫生部颁布的《人用重组DNA制品质量控制要点》到近年的《中国生物制品规程》和药典,都对DNA残留做了严格要求,部分标准高于国际标准。美国药典2015版(USP38-NF33)中增加了新的章节(General Chapter<30>)来进一步规范残留DNA的检测方法和标准物质。新版USP中将唯一推荐qPCR法作为生物制品中的宿主残留DNA检测方法。此外,在CAR-T细胞治疗中,病毒包装后的核酸去除也是必要质量控制,必须保证回输的细胞足够纯,减低风险和危害。

除却生物制品中必须要去除核酸残留,在平常的蛋白提取、生化分析样品回收中,核酸残留的影响也是非常大的,有效去除核酸残留,可明显降低细胞裂解液粘度,提高蛋白得率,蛋白生化分析中也可提高分辨率,并提高回收率。

在核酸残留去除工作中,难点是由于DNA带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集(吸附)、包裹作用而难以完全除去。传统的方法均存在低含量核酸残留去除不净、工作量大耗时长的致命缺陷,全能核酸酶可完美解决此类难点。



image.png