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二代测序文库构建

NovoNGS® CUT&Tag 2.0 High-Sensitivity
Kit (for Illumina®)

12次 / ¥11600


目录号:N259-YH01


产品描述:

NovoNGS® CUT&Tag High-Sensitivity Kit (for Illumina®) 是针对CUT&Tag法开发的专用试剂盒。在试剂盒的2.0版本中, CUT&Tag 2.0用高活性的pAG-Tn5融合蛋白替换了先前的pA-Tn5蛋白,转座酶所融合的pAG可以保证其对兔、鼠等多种来源的抗体具有广谱的强亲和活性,提高了CUT&Tag的特异性,并在抗体选择上具有更大的选择空间。

CUT&Tag(Cleavage Under Target & Tagmentation)是一种新兴的蛋白质-DNA互作研究方法,被用来替代传统的ChIP-Seq方法。CUT&Tag在高活性转座酶上融合了protein A/G抗体结合功能域,该功能域部分可以与靶向目的位点的抗体结合,使得Tn5转座酶在目的位点上被原位栓系,并且在目的位点附近进行打断的同时引入必要的接头序列,随后提取的DNA在经过PCR扩增后直接得到用于测序的文库。相比于被广泛应用的ChIP-Seq方法,CUT&Tag所需的细胞量更少,具有更高的信噪比和更好的可重复性。不需要进行甲醛交联固定和超声波打断,也不需要通过连接法添加测序接头,在简化操作、节省时间的同时,也提供了应用于单细胞测序研究的可能性。

试剂盒中包含了用于孵育抗体、转座体,转座体片段化的缓冲液和文库构建的整套相关试剂,并同时提供用于固定细胞的刀豆球蛋白AConA)磁珠。通过将细胞固定在ConA磁珠上,简化了更换反应体系和连续洗涤的操作,可以实现一管式操作。使用试剂盒提供的试剂和相应的实验流程,从细胞收集到PCR文库构建的整个实验流程可以在一天内完成。整个试剂盒中的所有酶和试剂都经过严格的质量控制和残留检测,确保了所获得文库的质量和稳定性。


产品用途:

蛋白质-DNA互作研究在常见的哺乳动物细胞系上用于替代传统的ChIP-Seq方法,特别适用于细胞数量较少的小样本。也可应用于经过特殊处理的植物和酵母样品上。 

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                  图1 DNA-Target Protein-Antibody-ChiTagTM结合示意图           图2 CUT&Tag实验流程简图


产品性能和应用实例:

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转座体单链接头序列:

Adaptor   1:

5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’

Adaptor   2:

5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’

ME:  

5'-pCTGTCTCTTATACACATCT-3'


转座体单链接头序列:

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACIndex1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’



For research only



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