mRNA疫苗体外合成解决方案

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mRNA疫苗体外合成解决方案


新冠mRNA疫苗制备流程:


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1、mRNA体外转录  相关产品:T7 RNA Polymerase (货号:E121)

高度特异识别T7启动子

单次反应RNA产量可达100μg(模板仅需100ng)

可对低至1ng模板进行有效转录

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Qubit数据显示,Novoprotein试剂盒20ul转录体系产物磁珠纯化后产量在100-150ug。

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Qsep1结果显示,体外转录得到的RNA完整性很好。


2、mRNA转录后修饰:加帽加尾


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2.1、mRNA加帽(Cap0)   相关产品:Vaccinia Capping system (货号:M062)        

高效完成mRNA加帽过程       

提高mRNA的稳定性,防止被RNA酶降解                                                           

提高mRNA的翻译效率


2.2、mRNA加帽(Cap1)  相关产品:mRNA 2’-O甲基转移酶 (货号:M072)

高效完成RNA 5´ 末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的甲基化      

使带帽 Cap 0甲基化为 Cap 1

提高 RNA 的翻译效率

改善 mRNA 显微注射和转染后的表达

降低免疫原性

Cap1更不容易被机体免疫系统的RNA感受器识别,因此免疫刺激更低


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2.3、mRNA加尾(PolyA)  相关产品: E. coli Poly(A) Polymerase (货号:M012)

稳定mRNA的存在形式

引导转录终止

提高RNA在真核细胞中的翻译效率


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左边novoprotein,右边某品牌A

酶加量 1:0U;2:5U;3:1U;4:0.2U;5:0.04U;6:0.008U


3、其他辅助产品  


3.1、防止mRNA降解 相关产品:RNase抑制剂 (货号:E125)

与RNase  A形成1:1复合体,对RNase 表现高度的非竞争性抑制,保护mRNA转录后不被降解

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65℃保温10min,40U酶活可保留一半以上,冻融10次酶活基本不受影响


3.2、降解模板DNA  相关产品:DNase I (货号:E127)

可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解,生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸。

mRNA转录结束后,消化模板DNA

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同对照相比均能很好的去除RNA样本中DNA残留


3.3、增加mRNA产量  相关产品:无机焦磷酸酶 (货号:M036)


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