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E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade

100U / 询价

目录号:GMP-M012-01A


产品描述:


通过加尾酶在mRNA 3' 末端引入Poly A尾,可增加mRNA的稳定性,增加mRNA翻译效率。使用加尾酶引入的Poly A尾的优势是简便易行,避免在质粒构建时引入过多的连续T碱基造成的质粒不稳定等问题。

E. coli Poly (A) Polymerase 不依赖模板的存在,可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端,即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率,可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。Poly (A)结构有助于提高 mRNA 的翻译效率。 

本制品利用大肠杆菌大规模发酵表达,采用药用规格原辅料生产,并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等,符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。


质量要求:


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遵循以下规范生产:


1. ISO 9001:2015, certified facility。

2. 《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。

3. 《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。

4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗,基因治疗和组织工程产品中的辅料。

5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。

6.Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。


产品用途:


1.  用于 RNA 3´末端标记。

2.  为 RNA 添加 Poly(A)尾,用于克隆或亲和纯化。比如将 miRNA 添加 Poly (A),为 cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点。

3.  提高 RNA 在真核细胞中的翻译效率。


活性定义:


在 37℃条件下,10 min 内将1 nmol AMP 掺入到 RNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位(U)。 


保存体系:


20mM Tris-HCl; 300mM NaCl; 1mM DTT; 1mM EDTA; 0.1%TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol, pH7.5。 


保存温度:


-20±5 ℃。


应用实例:


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完整mRNA在细胞内表达GFP蛋白,加帽酶与帽类似物对比


注意事项:   


1. 热失活条件:65℃,20 min。

2. 该酶只能以 RNA 为底物。

3. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性,并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)。

4. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液,也可以进行反应。

5. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性。

6. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响,不同的实验需要加 A 的量会有所不同,可通过减少反应时间来调整加 A 的长度,该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约 30 个 A 碱基,1 小时可加约 100 个 A 碱基。

7. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应,可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM,或直接对其进行纯化。


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For research and manufacturing use only.




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