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Renal Cancer Organoid Culture Medium(Cat. No.:OCMHC02)
DS
COA
价格:
规格:
50ml
100ml
500ml
数量:
-
1
+
产品描述
本产品为可用于肾癌类器官培养的无血清完全培养基,独特添加剂适用于肾癌类器官的生长与结构功能的维持。使用本产品培养得到的类器官能够有效保留原发肿瘤的组织特性,维持原发肿瘤组织异质性,可广泛应用于肿瘤基础研究、临床诊疗和新药开发等领域。
产品组成
产品名称货号规格产品组成储存有效期
Renal Cancer Organoid Culture MediumOCMHC02-M05050 mL肾癌类器官基础培养基-50 mL&肾癌类器官培养基添加剂(100×)-500μL-20±5℃12个月
Renal Cancer Organoid Culture MediumOCMHC02-M100100 mL肾癌类器官基础培养基-100 mL& 肾癌类器官培养基添加剂(100×)-1mL-20±5℃12个月
Renal Cancer Organoid Culture MediumOCMHC02-M500500 mL肾癌类器官基础培养基-500 mL& 肾癌类器官培养基添加剂(100×)-5mL-20±5℃12个月
  • 注意:(1)不同批号产品中的各组分不能混用;
  • (2)本产品运输过程中配有干冰或冰袋,请在收到后尽快按产品的储存要求转移至相应温度。本产品解冻后建议立即使用,若非立即使用请分装储存,避免反复冻融,且需在产品标签上的有效期内使用。
操作步骤
  • 肾癌类器官培养
  • 1. 实验前准备
  • 1.1 在冰上解冻200 μL的基质胶。
  • 注意:1. 该用量满足4个胶滴(每滴50 μL)的接种,如所需情况不同,可相应调整用量。
  • 2. 基质胶的解冻温度不得高于10℃。
  • 3. 解冻后立即使用,若不立即使用请分装并储存在-20 ± 5℃,使用过程中应避免反复冻融,并在产品标签上的有效期内尽早使用。
  • 1.2 自备组织消化液
  • 1.3 将接种用的60 mm培养皿及肾癌类器官完全培养基置于37℃预热至少30 min。
  • 1.4 将接种用的200 μL枪头置于2-8℃预冷至少2小时。
  • 2. 样本预处理
  • 2.1组织清洗
  • 将组织转移至无菌的50 ml离心管中,加入20-30 mL无菌生理盐水,通过手工颠倒或涡旋震荡仪进行清洗3-5次。
  • 2.2组织剪切
  • 取60 mm无菌培养皿放置于冰盒上,将清洗好的样本转移至培养皿中,使用无菌剪刀将组织剪至约1 mm3小块。
  • 2.3组织消化
  • 消化至组织松散、大部分组织碎片能够通过1 mL移液器吸头时结束。
  • 2.4终止消化
  • 待步骤2.3组织消化完成后,向悬液中加入5 mL无菌Hank's平衡盐溶液终止消化,1,500 rpm离心3 min,弃去上清备用。
  • 2.5组织过滤
  • 在步骤2.4的沉淀中加入5 mL无菌Hank's平衡盐溶液进行重悬,然后使用100 μm细胞筛网进行过滤,收集滤液至50mL无菌离心管中,1,500 rpm离心3 min,弃去上清收获细胞沉淀。
  • (可选)红细胞裂解
  • 在步骤2.5收获的细胞沉淀中加入2 mL红细胞裂解液进行重悬,室温(15-25℃)放置2-5 min后,加入4 mL无菌Hank's平衡盐溶液稀释终止裂解,1,500rpm离心3 min,弃上清收获细胞沉淀。
  • 注意:本步骤适用于细胞沉淀中含有较多红细胞时(沉淀呈红色),并可根据红细胞含量适当调整红细胞裂解液用量,其他情况下本步骤非必须。
  • 2.6制备细胞悬液
  • 利用细胞计数仪进行计数,使用肾癌类器官完全培养基重悬细胞沉淀,并制备成1-20×105/mL的细胞悬液。
  • 注意:细胞悬液的浓度可根据实验需要适当调整。
  • 2.7细胞接种和培养
  • 2.7.1在冰上取实验前预解冻的适当体积的基质胶与步骤2.6的细胞悬液(不超过200 μL)按照1:1的比例充分混匀,避免产生气泡。
  • 注意:本步骤操作应在冰上进行,避免基质胶凝固。
  • 2.7.2用预冷的枪头吸取50 μL步骤2.7.1制备的含基质胶的细胞悬液,接种至实验前预热的培养皿中,避免产生气泡。
  • 2.7.3重复步骤2.7.2直至接种完步骤2.7.1制备的细胞悬液。
  • 2.7.4将接种完细胞的培养皿放入CO2培养箱内(37℃、5%的CO2浓度)静置2 min,轻晃胶滴无明显流动后小心倒扣,待其充分凝固(约30 min)。
  • 2.7.5待胶滴充分凝固后,向培养皿中加入4 mL的肾癌类器官完全培养基,置于培养箱内(37℃、5%的CO2浓度)培养。
  • 3. 类器官的培养与维护
  • 接种后培养的细胞,需密切观察类器官的生长状况,每隔3-5天更换一次肾癌类器官完全培养基,一般情况下培养4-10天可得到类器官。根据类器官的生长情况及实验需求,后续进行肾癌类器官传代、冻存、复苏等操作。
  • 肾癌类器官的传代和冻存
  • 4. 类器官的传代
  • 4.1按步骤1.1、步骤1.3、步骤1.4进行相关准备,准备凝胶消化液,2-8℃储存备用。
  • 4.2吸出需传代样本培养皿中的培养液,弃去。
  • 4.3 在步骤4.2的培养皿中加入1-2 mL的凝胶消化液。
  • 4.4 使用凝胶消化液润湿1 mL的枪头尖端,并用该枪头尖端将步骤4.3的胶滴从皿底彻底刮除。用移液器反复吹打,将胶滴吹散,放入培养箱(37℃、5%的CO2浓度)消化5-10 min。
  • 注意: 1. 建议尽可能将胶滴吹散,避免影响消化效率。
  • 2. 使用移液器吹打时,应避免移液枪头尖端接触到皿底。
  • 3. 对于类器官平均直径小于30 μm及细胞活性不佳的样本应相应缩短消化时间,避免消化过度。
  • 4.5 将步骤4.4消化好的细胞悬液收集到15 mL无菌离心管中,加入10 mL无菌Hank’s平衡盐溶液,1,000 rpm离心3 min弃去上清备用。
  • 4.6 有关传代操作的后续步骤可参阅步骤2.6-2.7。
仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
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